BY4742酵母感受态细胞

保存条件：-80℃。

1.产品简介：

BY4742菌株来源于酿酒酵母原始菌株——S288C，是实验室的常用菌株，可直接通过PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入BY4742细胞内。质粒pYES2的筛选标志为URA，可用SD-URA板板进行筛选。BY4742感受态细胞经特殊工艺制作，pYES2质粒检测转化效率 >10⁴ cfu/ug DNA。

2.使用说明：

1).取一支无菌的1.5ml EP管，依次加入预冷的目的质粒1-3μg, .Carrier DNA 10μl(95-100℃ 5min快速冰浴，重复一次)，100μl冰.上融化的BY4742感受态细胞，PEG/LiAc 500ul， 轻轻翻转混匀6-8次;

2).30℃水浴30min，每10min轻轻翻转混匀6-8次;

3).每支加入20ul的二甲基亚砜; (用于提高转化效率，可不做)

4).42℃水浴15min，每5min轻轻翻转混匀6- 8次;

5).12000rpm瞬时离心弃上清,每支加入1m1的YPD Plus于30℃复苏1h; (用于提高转化效率， 可不做)

6).12000rpm瞬时离心弃上清，用100ul 0.9% NaCl 重悬，涂板,30℃培养48 - 96h。

3.注意事项：

1).感受态细胞最好在冰上融化, PEG溶液在低温环境下会析出，请于常温下完全溶解后使用。

2).转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3).同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

4).BY4742酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃;高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。

5).菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine合 成途径受阻;又由于其.ADE4,5, 6, 7, 8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylaminomidazole (AIR) 在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6).酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例:涂YPDA平 板29℃，48h培养可见直径1mm克隆;涂SD单缺平板29℃，48- 60h培养可见直径lmm克隆，涂SD双缺平板29℃，60- 80h培养可见直径1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培 养可见直径lmm克隆。

*本试剂仅供实验室研究使用