Y190酵母感受态细胞

保存条件：-80℃。

1.产品简介：

Y190是GAL4系统酵母双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒或与MATa型酵母菌株Y187通过mating进行筛库试验。

Transformation marker为: trpl， leu2， cyh2， 报告基因为:lacZ，HIS3，MEL1。Y190-GAL4酵 母双杂系统需要两种质粒配套使用: (pGB和pACT2)或( pGBKT7和pGADT7)。质粒pGB由pGBKT7改造而来，筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD与目标蛋白的融合蛋白;质粒pACT2与pGADT7的结构和功能类似，筛选标志为LEU，用于表达AD与目标蛋白的融合蛋白。Y190感受态细胞经特殊工艺制作，pGADT7质粒检测转化效率>104 cfu/ μg DNA。

基因型：MATa，ura3- -52，his3- -200，ade2-101， lys2-801, trp1-901 ，leu2-3，112， gal4△，gal80△，cyhr2， LYS2 : GAL1UAS-HIS3TATA-HIS3，MEL1 URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ

2.使用说明：

1).取一支无菌的1.5ml EP管，依次加入预冷的目的质粒1-3μg, .Carrier DNA 10μl(95-100℃ 5min快速冰浴，重复一次)，100μl冰上融化的感受态细胞，PEG/LiAc 500ul， 轻轻翻转混匀6-8次;

2).30℃ 水浴30min，每10min轻轻翻转混匀6-8次;

3).每支加入20ul的二甲基亚砜; (用于提高转化效率，可不做)

4).42℃水浴15min，每5min轻轻翻转混匀6- 8次;

5).12000rpm瞬时离心弃上清,每支加入1m1的YPD Plus于30℃复苏1h; (用于提高转化效率， 可不做)

6).12000rpm瞬时离心弃上清，用100ul 0.9% NaCl 重悬，涂板,30℃培养48 - 96h。

3.注意事项：

1).感受态细胞最好在冰上融化.

2).PEG溶液在低温环境下会析出，请于常温下完全溶解后使用。

*本试剂仅供实验室研究使用