Flag标签蛋白纯化试剂盒

试剂盒组分

一.产品介绍：

Flag标签是一个由八个亲水氨基酸组成的多肽片段，定位在融合蛋白表面，因此更易与抗体结合以及被肠激酶分解。Flag标签蛋白纯化试剂盒是以抗Flag(DYKDDDDK)抗体为亲和配体，一步纯化原核、酵母或哺乳动物细胞表达的Flag标签融合蛋白。Flag标签蛋白纯化试剂盒里的纯化填料以4%琼脂糖凝胶为基质，杂蛋白非特异性结合少，可用于Flag标签融合蛋白的纯化和免疫沉淀（IP）。

二. 产品使用操作:

1.样品准备

上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用平衡液对样品或细胞培养液稀释,或者用平衡液透析。

样品在上样前建议离心或用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤，减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

2.缓冲液的准备

基础缓冲液:按照实验所用量，取试剂盒中浓缩基础缓冲液，加入9倍体积的去离子水稀释成基础缓冲液；

洗脱液:按照实验所需用量，取试剂盒中浓缩洗脱液，加入9倍体积的去离子水稀释成洗脱液；

再生液:按照实验所需用量，取试剂盒中浓缩再生液，加入9倍体积的去离子水稀释成再生液；

缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

3.Frdbio® Flag Beads纯化柱的准备

取出试剂盒中预装柱平衡到室温，打开纯化柱底部开关，用3-5个体积去离子水冲洗柱床，随后用5-10个柱床体积基础缓冲液平衡柱子，确保柱床无气泡。

4.从样品中纯化目标蛋白

1）使用蠕动泵上样或者直接上样（重力法）；

上样量不要超过柱子的结合能力。

2）上样完毕后，用基础缓冲液洗掉未结合的杂蛋白，直到到紫外吸收监测仪达到一个稳定的基线（一般需要10-15个柱体积）；

3）使用洗脱液洗脱目的蛋白，顺次接收并做好标记，直到到紫外吸收监测仪达到一个稳定的基线（一般需要5-10个柱体积）；

4）SDS-PAGE检测分析得到的纯化样品（包括流穿组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品。

5.纯化柱清洗、再生与保存。

1）5-10倍柱床体积的洗脱缓冲液继续清洗；

2）3倍柱床体积的去离子水清洗；

3）5-10倍柱床体积的0.1M NaOH溶液；

4）3倍柱床体积去离子水清洗后于含20%乙醇的PBS 2-8℃保存。