关键词:抗体制备抗体标记重组蛋白表达

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细胞爬片免疫荧光实验步骤

来源:Frdbio发布时间: 2019-08-11 17:34:19丨 226人浏览

第一天:
1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min;
2.
用4%的多聚甲醛固定爬片15min, PBS浸洗玻片3次,每次3min;
3. 0.5%Triton X-100( PBS
配制 )室温通透20min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤);
4. PBS
浸洗玻片3次,每次3 min,吸水纸吸干PBS,在玻片上滴加正常山羊血清,室温封闭30min;
5.
吸水纸吸掉封闭液,不洗,每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗(使用浓度需要摸索,1:500前后摸索一下)并放入湿盒,4℃孵育过夜;


第二天:
6.加荧光二抗:PBST 浸洗爬片3次,每次3min,吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗,湿盒中20-37℃孵育1h,PBST浸洗切片3次,每次3min;注意:从加荧光二抗起,后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。
7.复染核:滴加DAPI避光孵育5min,对标本进行染核,PBST 5min×4次洗去多余的DAPI;8. 用吸水纸吸干爬片上的液体,用含抗荧光淬灭剂的封片液封片,然后在荧光显微镜下观察采集图像。


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