BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)

1.产品简介：

BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) 超敏感，最低检测浓度为 0.5 μg/ml。线性范围在 0.5～20 μg/ml，尤其适用于低浓度的样品。对大多数离子型和非离子型去污剂不敏感，但对Cu的还原剂和螯合剂敏感。比 Lowry 法更加简单快捷，60 min内完成测定。试剂稳定，室温可以放置两年，工作液 1 天内有效。终产物稳定，检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。最短可以检测双肽，所以适合于分子量较小的蛋白质，而 Bradford 法需要一定大小的蛋白质。有常规（普通试管）和微量（96 孔板）两种检测模式。

2.包装清单：

3.保存条件：本产品需4°C保存（BSA 标准品需要-20°C保存），有效期一年。

4.使用说明：

4.1 标准品以及工作液的制备:

A. 牛血清白蛋白标准品稀释液的制备

表1. 牛血清白蛋白标准品稀释液的制备

B.微量BCA工作液的制备

1)   使用下列公式计算出所需工作液的总体积：

(标准孔数 +待测样品孔数) × (重复数) × (每个样品孔的工作液体积) = 所需工作液的总体积

例如: 标准的试管测定每个样品需要3个不同的稀释度和2次重复

(8个标准孔 + 3个待测样品孔) × (2重复) × (1 ml) = 22 ml BCA工作液 (可以多配到25 ml)

2)   配制 BCA 工作液：

先将溶液A溶液B 和溶液C 按50：48：2 的比例混合，所得溶液即工作液。比如：5 ml 溶液A + 4.8 ml 溶液B +200 μl 溶液C。

4.2 测定：

A.微孔板测定法

1)   吸取150 μl的标准品及适当稀释的未知样品分别至微孔板中。

2)   滴加150 μl的工作液到每孔中并充分混合30 s。

3)   盖上微孔板并在37°C孵育2 h或60°C放置1 h。

4)   微孔板冷却至室温。

5)   在读数仪器中测量562 nm时的吸光值。

6)   用562 nm时所有的单个标准品和未知样品的吸光值减去562 nm时空白标准品的平均吸光值。

7)   用每个BSA标准品经562 nm时的空白孔校正过的平均读数和其相对应浓度(μg/ml)绘制标准曲线。然后再用该标准曲线判断每个待测样品的蛋白浓度。

B.试管测定法

1)   吸取1.0 ml的标准品及适当稀释的未知样品分别至对应标记的检测管中。

2)   滴加1.0 ml的工作液至每管中并充分混合。

3)   盖上检测管并于60°C水浴孵育1 h。

4)   所有试管冷却至室温。

5)   将分光光度计设置至562 nm，调零。然后在10 min内测量所有样品的吸收值。

6)   用562 nm时所有的单个标准品和未知样品的吸光率减去562 nm时空白标准品的平均吸光率。

7)   用每个BSA标准品经562 nm时的空白孔校正过的平均读数和其相对应浓度(μg/ml)绘制标准曲线。然后再用该标准曲线判断每个待测样品的蛋白浓度。

5.注意事项：

1)   在试管检测法中，每个样品需要1 ml的工作液，在微孔板检测中，每个样品需要150 μl的工作液。

2)   试剂C刚加入到试剂A和试剂B中时，会产生浑浊并迅速消失呈清绿色溶液。制备足够体积的工作液以检测相应数量的样品。工作液在室温密闭容器内，一天内可保持稳定。不需要避光保存。

3)   试管测试法时，试管冷却至室温后样品依然会继续显色。但是，在室温时的显色比例已经很低，在10 min内检测到的吸收值一般都不会有太大误差。

*本试剂仅供实验室研究使用