蛋白定量试剂盒BCA 法（微量法）

1．包装清单：

2．保存条件：4℃保存，2年有效。

3．产品简介：

BCA 法的原理是蛋白质在碱性条件下，将Cu2+ 转化成Cu+，Cu+通过与BCA 试剂的反应检测出。 此法为一步法，反应产物呈紫色，最大吸收峰为562nm，通过标准曲线测出未知蛋白的浓度。许多干扰因素对此法没有影响，特别是一定范围内的蛋白质变性剂如尿素和盐酸胍。

4．使用前准备

1). 准备工作液：将25 份试剂B 与 1 份试剂C 混合，混匀后再与26 份A 液混合，混合液呈苹果绿色，室温稳定1 周

2). 准备标准品：用蒸馏水将1mg/mL BSA 储存液配制成：100、50、25、12.5、6.3、3.1、1.6、0.8、0μg/mL。

5．实验步骤

1). 取标准品或待测样品溶液1mL 加入到1 mL 工作液中（也可取250uL 样品加入到

250uL 工作液中)，混匀，60°C 孵育30 min

2). 将温度降至室温，测562 nm 吸光度（1 小时之内测定）。

3). 以浓度作为横坐标，吸光度作为纵坐标绘制标准曲线，根据样品的吸光度值在标准

曲线上查样品的浓度值。

6．注意事项

1). 标准法的检测范围：100μg/mL～0.5μg/mL，高于此范围，建议适当稀释后测定。

2). 延长孵育时间可以增加灵敏度，颜色太深，可以缩短加热时间，注意采用相同的方法处理标准品和样品）

3). BCA 检测方法依赖蛋白质氨基酸的成分，不能测定蛋白质的绝对量，BSA 标准曲线仅用于比较相似蛋白质溶液的浓度。

4). 某些试剂会干扰BCA 法的检测，脂类导致吸光度增高。含巯基的缓冲液可导致实验误差。

5). 螯合剂如EDTA 等可能干扰检测，通过稀释样本可解决此问题，同时，稀释也可以减轻其它因素的干扰。

*本试剂仅供实验室研究使用