mRNA反转录/cDNA的合成

mRNA反转录/cDNA的合成

1）去DNA: 反应体系：DNaseⅠ0.2μl，10×DNase Buffer 0.8μl， RNA溶液 7μl；反应程序：37℃，30min；70℃，10min。

2) RNA的变性：反应体系：Oligo dT/Random Primer 1μl，dNTP Mix 1μl，去DNA后的RNA 8μl；反应程序： 65℃，5min，冰上迅速冷却。

3)cDNA的合成：反应体系：变性后的RNA 10μl，5×primescript Buffer 4μl，RNase Inhibitor 0.5μl，Primescript RTase 1μl，RNase-free H2O 4.5μl；反应程序：42℃，40～60min，70℃，15min。

合成后的cDNA -20℃保存。