BCA蛋白定量试剂盒

1．包装清单：

2．保存条件：

BCA试剂 A和B 在4℃保存，蛋白标准品在-20℃保存，本试剂盒自订购之日起一年内有效。

3．产品简介：

BCA(bicinchoninic acid)是理想的蛋白质定量方法，是当前比Lowry法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品，测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞裂解实验中，常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。该产品不受此影响，因此与之配合使用，可免除您实验中的许多烦恼。

基本原理：碱性条件下，蛋白将Cu²⁺还原为Cu⁺， Cu⁺与BCA试剂形成紫颜色的络合物，吸光度强度与蛋白浓度成正比。测定其在562 nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。

4．使用说明：

A．试管法

1)  配制工作液: 根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积 BCA试剂B（50:1）配

2)  制适量BCA工作液，充分混匀。

3)  稀释标准品：将标准品储存液稀释至25～2000 μg/ml。

4)  将0.1 ml的标准品和样本分别添加于测试管中。

5)  各管加入2 ml BCA工作液，37℃放置30 min。（增加孵育时间和温度能够增加562 nm的吸光度值和检测最低浓度，降低测量范围）

6)  冷却到室温，（BCA不会达到真正的反应终止点，当冷却到室温时颜色依然会产生。但是在室温下颜色产生的效率非常低，在冷却后10 min内测量完所有试管则无影响）用酶标仪测定A562，根据标准曲线计算出蛋白浓度。

B．微孔板法

1)  配制工作液（同上）

2)  稀释标准品（同上）

3)  将25 μl的标准品和合适浓度范围的样本分别添加于96孔板的微孔中。

4)  各孔加入200 μl BCA工作液，充分混匀。

5)  盖上96孔板盖，37℃孵育30 min。

6) 冷却到室温，用酶标仪测定A562，根据标准曲线计算出蛋白浓度。

5．注意事项：

1)  在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或37℃温育或微波几十秒使溶解, 如发现细菌污染则应丢弃。

2)  样品中若含有EDTA、EGTA、DTT、硫酸铵、脂类会影响检测结果，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒；高浓度的去垢剂也影响实验结果，可用TCA沉淀去除干扰物质。

3)  要得到更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔且标准品与样品处理要尽量一样（如采用同样的溶液溶解样品和标准品）, 每次均应做标准曲线。

4)  当试剂A和B混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失。

需准备37℃水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计，测定波长为540-595 nm之间，562 nm最佳。酶标仪需与96孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时，试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

*本试剂仅供实验室研究使用