E.coli BL21(DE3)Condon Plus感受态细胞

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1.产品简介：

本产品是采用大肠杆菌E.coli BL21(DE3) Condon Plus感受态细胞菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。补充4种稀有密码子(AGA、AUA、CCC、CUA)；提高富含AT-或 GC-的真核基因在原核系统中的表达水平。

基因型：F–ompThsdS(rB–mB–)dcm+Tetrgalλ(DE3)endAHte[argUproLCamr][argUileYleuWStrep/Specr]

特点：1．来源于Stratagene公司的BL21-Gold菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，从而减少对重组蛋白的降解，补充大肠杆菌缺乏的4种稀有密码子(AGA、AUA、CCC、CUA)对应的tRNA（argU、ileY、proL、leuW），提高外源基因，尤其是富含AT-或GC-的真核基因在原核系统中的表达水平。2．该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区（DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶），可同时表达T7RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。3．具四环素，氯霉素，链霉素，壮观霉素抗性。pUC19质粒检测，转化效率可达10⁸cfu/μg DNA。

2.使用说明：

1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30min。
3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。
4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。
5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养， 37℃培养12~16h。

3.注意事项：

1．刚化冻的细胞转化效率最高，避免反复化冻。

2．整个动作要轻柔。

3．质粒质量和浓度等的差异会使转化效率有所下降。

*本试剂仅供实验室研究使用