E.coli Rosetta(DE3) 感受态细胞

保存条件：-80℃。

1.产品简介：

本产品是采用大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3) 感受态细胞菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。补充6种稀有密码子（AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA），提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。

基因型：F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3) pRARE(argU，argW，ileX，glyT，leuW，proL)(CamR)

特点：1. 含有pRARE质粒，补充大肠杆菌缺乏的6 种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)对应的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。2. 菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。具氯霉素抗性。pUC19质粒检测，转化效率可达108cfu/μg DNA。

2.使用说明：

1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30min。

3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。

4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。

5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12~16h。

3.注意事项：

1. 刚化冻的细胞转化效率最高，避免反复化冻。

2. 整个动作要轻柔。

3. 质粒质量和浓度等的差异会使转化效率有所下降。

*本试剂仅供实验室研究使用