Rosetta-gamiB(DE3)感受态细胞

保存条件：-80℃。

1.产品简介：

本产品是采用大肠杆菌Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。Rosetta-gami B(DE3) 菌株聚合了BL21，Tuner，Origami和Rosetta四种菌株的优点。

基因型：F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pRARE (Camr, Kanr, Tetr)

特点：1．来源于Origami B系列菌株，是集合了BL21系列，Rosetta系列菌株和Origami系列菌株的优点，极大的增强了细胞内二硫键的形成和含有在大肠杆菌中稀有密码子的真核细胞蛋白的表达能力。2．lacY1基因 (半乳糖苷透性酶基因)突变赋予其，IPTG以均一速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞，产生更加严格、均一的浓度依赖。3．pRARE补充大肠杆菌缺乏的6 种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平。4．突变的硫氧还蛋白还原酶(trxB)和谷胱甘肽还原酶 (gor)基因，它们是还原途径的两个关键酶，其突变有利于高效形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。5．该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区，含有T7噬菌体RNA聚合酶，适合T7启动子诱导的蛋白表达，及其他T7启动子系列载体。Rosetta-gamiB(DE3)菌株具有卡那霉素，氯霉素，四环素抗性。pUC19质粒检测，转化效率可达10⁸cfu/μg DNA。

2.使用说明：

1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30min。
3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。
4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60m使菌体复苏。
5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养， 37℃培养12~16h。

3.注意事项：

1．刚化冻的细胞转化效率最高，避免反复化冻。

2．转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3．诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2 mM均可）。

4．获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

*本试剂仅供实验室研究使用