1．包装清单：

2．保存条件：本产品4℃保存，一年有效。

3．产品简介：

Western及IP细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP)，是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。主要成分为20 mMTris (pH7.5)，150 mMNaCl，1% Triton X-100，以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，EDTA，Na₃VO₄，leupeptin等多种抑制剂。本细胞裂解液裂解的细胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。裂解得到的蛋白样品，可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(WB0123/ WB0124/ WB0125/ WB0126)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

4．使用方法:

A．对于培养细胞样品：

取适当量的RIPA裂解液混匀，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。

B．对于贴壁细胞，

去除培养液用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。轻轻的摇晃约5-10 min。充分裂解后，10000-14000g离心10 min，取上清。

表--裂解液用量说明：用于不同规格标准培养板裂解液容量

C．对于悬浮细胞：

离心收集细胞，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍.加入适量裂解液,用枪吹打把细胞吹散。用手指轻弹或旋涡震荡5-10 min以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装然后再裂解。充分裂解后，10000-14000g离心10 min，取上清。

D．对于组织样品：

1)        手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中，漂洗数次，以清洁表面的血迹，将组织称量后切成几个较小的组织块放入组织匀浆器中。

2)        取适当量的RIPA裂解液混匀，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。

3)        按组织净重（g）：裂解液(ml)=1：10的比例，加入相应体积的裂解液进行匀浆(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量) 。

4)        用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5)        充分裂解后，10000-14000g离心3- 5 min，取上清。

5．注意事项：

1)        抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。建议将样品分装成合适的量，然后冷冻干燥或直接以液体状态置-20℃中保存，不要反复冻融。

2)        需自备PMSF。建议在临用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。PMSF(WB0114)可以向我公司订购。

3)        为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

*本试剂仅供实验室研究使用