Bradford蛋白浓度测定试剂盒 

1．包装清单：

2．保存条件：Bradford蛋白浓度测定染液4℃保存，蛋白标准-20℃保存，保存一年内有效。

3．产品简介：

Bradford蛋白浓度测定试剂盒(Bradford Protein Assay Kit)是根据最常用的两种蛋白浓度检测方法之一Bradford法研制而成，实现了蛋白浓度测定的快速，稳定和高灵敏度。检测速度极快，10-80个样品只需不足10 min即可完成。灵敏度高，检测浓度下限达到25 μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5 μg，待测样品体积为1-20 μl。在50-1000 μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20、60、80低于0.015%。含去垢剂的样品推荐使用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(WB0123)。每个试剂盒可以检测1000个样品。

4．使用方法：

4．1标准品的制备

A．牛血清白蛋白标准品稀释液的制备

4．2试管测定法

A．标准试管测定法（检测范围=100-1,500 μg/ml）

1)  各取0.05 ml的标准品和未知样品至相应标记的测试管中。

2)  滴加1.5 ml Bradford蛋白浓度测定染液至每管中并充分混匀。

3)  可选参考: 对于大多数情况，在室温下孵育样品10 min。

4)  设置分光光度计值于595 nm并将仪器调零。然后检测所有样品的吸收值。

5)  将所有标准品及未知样品的数值中减去595 nm下零孔所对应的平均值。

6)  绘制标准曲线：通过零孔平均值校正每个BSA标准品在其相应浓度下所对应的数值。再用此标准曲线判断得出每个未知样品的蛋白浓度。

B．微量试管测定法（检测范围= 1-25 μg/ml）

1)  各取1.0 ml的标准品和未知样品至相应标记的测试管中。

2)  滴加1.0 ml Bradford蛋白浓度测定染液至每管中并充分混匀。

3)  可选参考: 对于大多数情况，在室温下孵育样品10 min。

4)  设置分光光度计值于595 nm并将仪器调零。然后检测所有样品的吸收值。

5)  将所有标准品及未知样品的数值中减去595 nm下零孔所对应的平均值。

6)  绘制标准曲线：通过零孔平均值校正每个BSA标准品在其相应浓度下所对应的数值。再用此标准曲线判断得出每个未知样品的蛋白浓度。

4．3微孔板测定法

A．标准微孔板测定法（检测范围=100-1,500 μg/ml）

1)  各取10 μl的标准品和未知样品至相应标记的微孔板中。

2)  滴加300 μlBradford蛋白浓度测定染液至每孔混匀并充分震荡30 s。

3)  停止震荡。对于大多数情况，在室温下孵育样品10 min。

4)  在读数仪器中测量595 nm时的吸光值。

5)  将所有标准品及未知样品的数值中减去595 nm下零孔所对应的平均值。

7)  绘制标准曲线：通过零孔平均值校正每个BSA标准品在其相应浓度下所对应的数值。再用此标准曲线判断得出每个未知样品的蛋白浓度。

B．微量微孔板测定法（检测范围= 1-25 μg/ml）

1)  各取150 μl的标准品和未知样品至相应标记的微孔板中。

2)  滴加150 μl Bradford蛋白浓度测定染液至每孔混匀并充分震荡30 s。

3)  停止震荡。对于大多数情况，在室温下孵育样品10 min。

4)  在读数仪器中测量595 nm时的吸光值。

5)  将所有标准品及未知样品的数值中减去595 nm下零孔所对应的平均值。

8)   绘制标准曲线：通过零孔平均值校正每个BSA标准品在其相应浓度下所对应的数值。再用此标准曲线判断得出每个未知样品的蛋白浓度。

5．注意事项：

1)  将G250染液回复到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度，G250染液使用前请颠倒3-5次，混匀。

2)  蛋白标准请在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。

3)  为了测试准确，请在试剂加入后的5-20 min内测定光吸收，因为在这段时间内颜色是最稳定的。

4)  有些阳离子如K⁺、Na⁺、Mg²⁺、等物质不干扰测定，但大量的去污剂如TritonX-100、SDS等严重干扰测定。

5)  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

*本试剂仅供实验室研究使用