E.coli Top10感受态细胞

保存条件：-80℃。

1.产品简介：

本产品是采用大肠杆菌Top10感受态细胞菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。常规实验室克隆比DH5α快，转化效率高，可用于蓝白斑筛选。

基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15Δ lacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galUgalK rpsL (StrR) endA1 nupG

特点：1.TOP10菌株来源于MC1061菌株，是目前实验室最常用的感受态细胞之一，基因型与DH10B高度类似（DH10B 为 galE15 型，而 TOP10 为 galU 型）。2. 生长速度快（比 DH5α快，但比 Mach1-T1 生长速度慢），10 小时可见克隆3. recA1和endA1的突变,有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。3.存在lacIqZΔM15基因使此菌株可以进行蓝白斑筛选。可用于构建克隆，蓝白斑筛选等实验，具链霉素抗性。pUC19质粒检测，转化效率可达10⁸ cfu/μg DNA。

2.使用说明：

1． 取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30min。
3． 42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。
4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。
5． 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12~16h。

3.注意事项：

1. 刚化冻的细胞转化效率最高，避免反复化冻。

2. 整个动作要轻柔。

*本试剂仅供实验室研究使用