E.coli Origami 2(DE3) 感受态细胞

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1.产品简介：

本产品是采用大肠杆菌E.coli Origami 2(DE3) 感受态细胞菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。Origami 2系列菌株是集合BL21，Tuner和Origami三种菌株的优点于一身，细胞质内生成二硫键，有助于含二硫键蛋白的活性蛋白形成。

基因型：Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL F′[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB (StrR, TetR)

特点：1. Origami 2菌株包含突变的硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase）(trxB) 和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase)(gor)基因，表达主要还原途径的两个关键酶。有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。2. 与Origami系列感受态相比，Origami 2系列感受态细胞是卡那敏感的，这使得该菌株适用范围更广。3. 亮氨酸生长缺陷型宿主菌。具链霉素，四环素抗性。pUC19质粒检测，转化效率可达10⁷cfu/μg DNA。

2.使用说明：

1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30min。

3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。

4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。

5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养， 37℃培养12~16h。

3.注意事项：

1．刚化冻的细胞转化效率最高，避免反复化冻。

2．质粒质量和浓度等的差异会使转化效率有所下降。

*本试剂仅供实验室研究使用