多克隆抗体制备——动物血清的采集与保存

抗体效价检测达到预期要求即可进行动物血清收集，下面以最常用的兔颈动脉放血的为例进行叙述。

1. 兔颈动脉放血与血清分离

1.1将免疫兔仰面固定于固定架上，头部放低，暴露颈部。

1.2 沿中部中线用2%普鲁卡因液局部麻醉，15min后剪开颈中部皮肤10cm长。沿气管钝性分离皮下组织，暴露气管前的胸锁乳突肌。

1.3 分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角疏松组织，肌束下面靠近气管两侧，找到颈部动脉（鲜红色搏动），分离颈动脉，两根棉线分别套入颈动脉，其中一根扎紧在颈动脉的远心端，另外一根暂时不扎。

1.4 腹腔内注射1mg肾上腺素。

1.5 止血钳夹紧颈动脉近心端血管，用眼科剪刀在棉线扎系结与止血钳之间血管侧面剪开一个小口，将采血针塑料管向近心端方向插入，并扎系固定塑料管，将塑料管裸露的一头引入离心管并固定，松开近心端止血钳，血液就可以喷入离心管。

1.6 太高固定架尾部，同时挤压心脏，可以增加取血量，一般每只兔子可以缺血80～100ml。

1.7 将血清放在室温1h,然后放在4℃过夜，使血块收缩。

1.8 将离心管放入离心机，4℃ 2,500rpm离心30min，收取上层血清。

2. 血清的保存

将以上获取的抗血清加入0.01%硫柳汞后者0.1%叠氮化钠，可于4℃保存3个月，后者加入30%甘油-20℃以下保存，建议分装成小管，避免反复冻融。