重组蛋白纯化——NI亲和层析柱纯化包涵体

1. 样品制备：包涵体蛋白样品

1.1 将诱导表达结束后的培养物转移到离心管中，8,000rpm，离心15min收集菌体，然后加入1/10体积的裂解缓冲液（50 mM NaH2PO4，300 mM NaCl，10 mM imidazole pH 8.0，1mM PMSF) ,加入0.2～0.4mg/ml溶菌酶。

（PMSF很容易降解,在破菌前加入,同时还可加入不影响目的蛋白与树脂结合的蛋白酶抑制剂。）

1.2 将菌体沉淀悬浮起来（如果菌液浓度高，也可考虑加入10μg/ml RNase A和5μg/ml DNase I），混匀，放置于冰上，然后冰上超声破碎细胞。

1.3 将破碎液转移至离心管中，10,000rpm，4℃离心20～30min，去掉上清,沉淀为包涵体。

1.4 步骤1.2和1.3可以重复一次。

1.5 按照原菌体:包涵体溶解缓冲液（50 mM NaH2PO4，300 mM NaCl，10 mM imidazole，8M尿素，pH 8.0）=1:10(W/V)将包涵体悬浮溶解，此为包涵体溶液。

（包涵体溶液可用于变性条件下His标签蛋白的纯化。）

2. 样品纯化

纯化方法与“重组蛋白的纯化——可溶性蛋白纯化(NI)”里介绍的His标签融合蛋白Ni-NTA的纯化方法完全相同，不同点在于纯化过程所有溶液都在上述实验基础上都添加8M尿素。