你所不知道的FITC秘密

异硫氰酸荧光素 (FITC)作为最常用的标记荧光素因为其物美价廉备受青睐，但是该试剂在生产过程中，产生两种异构体：即在在荧光素羧基苯环的 5 位和 6 位产生差异；两种异构体的光谱在波长和强度上几乎无法区分。 然而，异构体与蛋白质结合的几何形状可能不同，并且偶联物可能在不同的色谱条件下表现的理化性质完全不同，甚至更容易被洗脱，因此，作为标记的FITC最好选用某一种异构体，通常选择5-位异构体，倒不是因为这个异构体比6-位好，而是因为5-位异构体更容易纯化。

尽管很多人喜欢用FITC，但是FITC标记的蛋白/或者抗体更容易脱落或者降解，之所以受到青睐是因为其物美价廉；基于此缺陷，我们对其标记活性基团进行改造，并且增加了延长臂，避免荧光基团与蛋白/抗体结合造成荧光淬灭，实验也表明，经过改在的荧光标记效率和荧光强度是FITC的2倍以上。