福因德生物《蛋白表达与抗体制备》技术手册
前 言
本书由福因德生物技术团队编写,旨在与实验人员分享重组蛋白和抗体制备科研工作中实践经验。全书以实际操作经验为主,为了叙述方便,适当叙述一些浅显理论。我们将实验室的标准操作流程(SOP)分享给广大科研工作者,不管之前是否从事过此类工作,也不管是否有专业基础知识,翻开这本书按照SOP可以快速进入实验。SOP中所涉及的核心试剂与材料,由福因德生物自己研发生产,保证流程的稳定性和经济性。福因德生物所提供的试剂都是常年测试验证的,科研用户可以放心选购。
为叙述方便,本书SOP中所用到的溶液在文中用黑体标注,其配方紧跟其后括号内详注。因此,在进行实验前应该先通读整个SOP,并预先配制/准备SOP中每一个溶液和材料,才能保证实验顺利进行。SOP中用特殊标记凸显的文字注释,一定要注意阅读,这些注意事项都是至关重要的。部分SOP后面附加了实验中可能遇到的问题及解决方案,这些都是科研工作者遇到最多的问题,所以特别列出来。如果在进行实验中还有文中没有列出的或者其他SOP进行中遇到的问题都可以联系我们福因德技术团队(tech@friendbio.com )。
如果想要快速进入实验,请从每章内容里面的SOP开始,以节约您的时间。
本书只是介绍抗体制备最基本的方法流程,要想成为抗体的专业技术人才,非要经过长期孜孜不倦地积累,以及完整的分子生物学和免疫学知识体系作为支撑。
抗体制备绝非简单的一个动物免疫,还牵涉后期纯化和修饰,抗体纯化和修饰的成本要远远高于前期抗血清的制备,抗体制备其实是一个技术和艺术活,无论多么精雕细琢都不为过。
由于知识水平的限制,本书在编写过程中难免会有错误,请读者多提意见与建议,以便再版时我们作出修正。对于读者的意见与建议,我们一定虚心接受并真诚致谢。
福因德生物技术团队
2017.5
各章节中包含以下标准流程:
SOP01 动物组织及细胞mRNA的提取制备
SOP02 mRNA反转录/cDNA的合成
SOP03 酶切连接法构建载体
SOP04 Simpleclone重组法构建载体
SOP05 Ni-NTA层析柱亲和纯化6His标签融合蛋白
SOP06 谷胱甘肽亲和柱纯化带谷胱甘肽还原酶(GST)标签蛋白
SOP07 GST融合蛋白柱上酶切
SOP08 包涵体蛋白纯化
SOP09 Ni-NTA Beads亲和层析纯化6His融合标签包涵体蛋白
SOP10 –SH介导多肽与载体偶联
SOP11 EDC或EDC/NHS介导多肽与载体偶联
SOP12 GA(Glutaraldehyde,戊二醛)介导多肽与载体偶联
SOP13 兔耳静脉取血方法
SOP14 大小鼠眼眶取血方法
SOP15 免疫抗原准备(抗原乳化)
SOP16 动物注射免疫
SOP17 鸡的选择和免疫
SOP18 间接ELISA法检测抗血清效价
SOP19 兔颈动脉放血与血清分离
SOP20 琼脂扩散实验检测抗血清效价
SOP21 单克隆抗体杂交瘤细胞融合
SOP22 杂交瘤融合细胞铺板培养
SOP23 杂交瘤细胞的亚克隆
SOP24 单克隆细胞株冻存
SOP25 单克隆细胞株细胞复苏
SOP26 小鼠腹水生产
SOP27 (NH4)2SO4沉淀法纯化抗体
SOP28 辛酸-硫酸铵沉淀纯化抗体
SOP29 Protein A /Protein G/ Protein L亲和纯化抗体
SOP30 含氨基配体特异性亲和柱的制备
SOP31 含巯基抗原/多肽特异性亲和柱的制备
SOP32 水稀释法提纯IgY抗体
SOP33 抗体/蛋白的HRP标记(NaIO4氧化法)
SOP34 抗体/蛋白的FITC标记
SOP35 抗体/蛋白的生物素(Biotin)标记
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