RIPA裂解液（弱）

1．包装清单：

2．保存条件：本产品4℃保存，一年有效。

3．产品简介：

我们生产的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA裂解液(弱)的主要成分为50 mM Tris (pH 7.4)，150 mM NaCl，1% NP-40，0.25% sodium deoxycholate，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(WB0123/WB0124/ WB0125/ WB0126)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

4．使用方法：

A ．对于培养细胞样品：

取适当量的RIPA裂解液混匀，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。

B．对于贴壁细胞样品：

去除培养液用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。轻轻的摇晃约5-10 min。充分裂解后，10000-14000g离心10 min，取上清，即可进行后续操作。

表--裂解液用量说明： 用于不同规格标准培养板裂解液容量

C．对于悬浮细胞样品：

离心收集细胞，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍.加入适量裂解液,用枪吹打把细胞吹散。用手指轻弹或旋涡震荡5-10 min以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装然后再裂解。充分裂解后，10000-14000g离心10 min，取上清，即可进行后续操作。

D．对于组织样品：

1)  手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中，漂洗数次，以清洁表面的血迹，将组织称量后切成几个较小的组织块放入组织匀浆器中。

2)  取适当量的RIPA裂解液混匀，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。

3)  按组织净重（g）：裂解液(ml)=1：10的比例，加入相应体积的裂解液进行匀浆(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,，如果需要高浓度的蛋白样品, 可以适当减少裂解液的用量) 。

4)  用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

5)  充分裂解后,10000-14000g离心3- 5 min，取上清，即可进行后续作。

5． 注意事项：

1)  抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。建议将样品分装成合适的量，然后冷冻干燥或直接以液体状态置-20℃中保存，不要反复冻融。

2)  需自备PMSF。建议在临用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。PMSF(WBR0114)可以向我公司订购。

3)  RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；否则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。

4)  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

*本试剂仅供实验室研究使用