KM71酵母感受态细胞

保存条件：-80℃。

1.使用说明：

1). 取需转化质粒5µg，酶切，回收

2）取一支无菌的1.5ml EP管，依次加入预冷的线性质粒1-5 µg （体积不高于15 µl），酵母促转化剂10µl，100µl冰上融化的 KM71感受态细胞，毕赤酵母转化液 500µl，轻轻翻转混匀6-8次

3).30℃ 水浴30min，每10min轻轻翻转混匀6-8次;

4).每支加入20ul的二甲基亚砜（用于提高转化效率，也可不做）

5).42℃水浴15min，每5min轻轻翻转混匀6- 8次;

6).12000rpm瞬时离心弃上清,每支加入1m1的YPD Plus于30℃复苏1h（用于提高转化效率，也可不做）

7).12000rpm瞬时离心弃上清，用100ul 0.9% NaCl 重悬，涂板,30℃培养48 - 96h。

2.注意事项：

1).使用酵母促转化剂前，请把装有酵母促转化剂的管子在沸水 中煮沸5min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用

2). 转化液低温环境下会析出，请于常温下完全溶解后使用

3).转化全过程要无菌操作

*本试剂仅供实验室研究使用