NMY51 酵母感受态细胞

保存条件：-80℃。

1.产品简介：

DUAL membrane系统是专门筛选跨膜蛋白间相互作用的检测技术， 它利用分离的泛素系统 直接检测天然状态下膜蛋白间的相互作用的酵母双杂系统。此系统采用NMY51酵母菌株，可直接转化质 粒进行蛋白互作验证或筛库试验；此菌株Transformation marker为：trp1，leu2-3，报告基因为：HIS3，ADE2和 lacZ， 第一步通过营养缺陷型报告基因 (HIS3，ADE2)进行选择性生长 筛选，进一步通过 LacZ报告基因进行β-半乳糖分析显色的定 量或半定量筛选，三个独立的报告基因，受不同启动子的调控， 降低假阳性几率。此系统可使用四种Bait质粒：pBT3-N，pBT3- C，pBT3-SUC，pBT3-STE，筛选标志均为LEU；四种Prey质粒： pPR3-C，pPR3-N，pPR3-SUC，pPR3-STE，筛选标志均为TRP。 NMY51感受态细胞经特殊工艺制作，pGADT7质粒检测转化效率 >10⁴cfu/μg DNA

基因型：MATahis3200trp1-901leu2-3,112ade2LYS2::(lexAop)4- HIS3ura3::(lexAop)8-lacZade2::(lexAop) 8-ADE2 G

2.使用说明：

1).取一支无菌的1.5ml EP管，依次加入预冷的目的质粒1-3μg, Carrier DNA 10μl(95-100℃ 5min快速冰浴，重复一次)，100μl冰.上融化的NMY51感受态细胞，PEG/LiAc 500ul， 轻轻翻转混匀6-8次;

2).30℃ 水浴30min，每10min轻轻翻转混匀6-8次;

3).每支加入20ul的二甲基亚砜; (用于提高转化效率，可不做)

4).42℃水浴15min，每5min轻轻翻转混匀6- 8次;

5).12000rpm瞬时离心弃上清,每支加入1m1的YPD Plus于30℃复苏1h; (用于提高转化效率， 可不做)

6).12000rpm瞬时离心弃上清，用100ul 0.9% NaCl 重悬，涂板,30℃培养48 - 96h。

3.注意事项：

1).感受态细胞最好在冰上融化。

2). PEG溶液在低温环境下会析出，请于常温下完全溶解后使用。

*本试剂仅供实验室研究使用