R5421 酵母感受态细胞

保存条件：-80℃。

1.产品简介：

R5421酿酒酵母菌株为K+/钾离子缺陷型菌株，在文献中也称为 CY162，MATα型，多用于K+/钾离子转运蛋白的鉴定试验中，也可用于K+/钾离子通道或钠钾离子泵的鉴定试验。 Transformation marker为：ura3，leu2，该菌株可以在含有 100mM KCl的培养基中正常生长，在含有5-10mM KCl的培养基中 生长缓慢，当培养基中KCl浓度低于0.5mM，R5421（CY162）细 胞停止生长。R5421感受态细胞经特殊工艺制作，pGADT7质粒检 测转化效率>10⁴ cfu/μg DNA

基因型：MATα ura3-52 leu2 trk1Δ his3Δ200 his4-15 trk2Δ1::pCK64

2.使用说明：

1).取一支无菌的1.5ml EP管，依次加入预冷的目的质粒1-3μg,Carrier DNA 10μl(95-100℃ 5min快速冰浴，重复一次)，100μl冰.上融化的R5421感受态细胞，PEG/LiAc 500ul， 轻轻翻转混匀6-8次;

2).30℃ 水浴30min，每10min轻轻翻转混匀6-8次;

3).每支加入20ul的二甲基亚砜; (用于提高转化效率，可不做)

4).42℃水浴15min，每5min轻轻翻转混匀6- 8次;

5).12000rpm瞬时离心弃上清,每支加入1m1的YPD Plus于30℃复苏1h; (用于提高转化效率， 可不做)

6).12000rpm瞬时离心弃上清，用100ul 0.9% NaCl 重悬，涂板,30℃培养48 - 96h。

3.注意事项：

1).感受态细胞最好在冰上融化,。

2).PEG溶液在低温环境下会析出，请于常温下完全溶解后使用。

*本试剂仅供实验室研究使用