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T7 RNA Polymerase (50 U/μL) 产品说明书
产品名称 | 规格 |
T7 RNA Polymerase (50 U/μL) | 100 μL |
Transcription Buffer (10 ×) | 1 mL |
产品概述
T7 RNA Polymerase，即T7 RNA聚合酶，是一种对T7噬菌体启动子具有高度特异性的DNA依赖性RNA聚合酶。该酶以含有T7启动子序列的单链或双链DNA为模板，以NTP为底物，合成与T7启动子下游的DNA一条链互补的RNA。
产品基本信息
产品名称 | T7 RNA Polymerase |
来源 | E.coli |
活性 | 50 U/μL |
储存缓冲液 | 50 mM Tris-HCl (25℃, pH 7.9), 100 mM NaCl, 1 mM EDTA; 2mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% (v/v) Glycerol |
储存条件 | -20℃ |
反应缓冲液（1X） | 40 mM Tris-HCl, 27 mM MgCl2, 10 mM DTT, 2 mM spermidine |
酶活定义 | 在37℃ pH8.0的条件下，1小时内使1 nmol的[3H]ATP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位 |
产品应用
用于单链RNA合成，包括mRNA，siRNA，gRNA等各类RNA前体。以及合成RNA探针，还可以利用帽类似物合成加帽RNA。
实验流程
1、将各组分解冻分别混匀后，短暂离心使液体收集于管底，置于冰上。
2、体外转录体系
组分 | 用量 | 终浓度 |
Transcription Buffer (10 ×) | 2 μL | 1 × |
T7 RNA Polymerase (50 U/μL) | 2 μL | 5 U/μL |
ATP/CTP/GTP/UTP (100 mM) | Each1.5 μL | Each 7.5 mM |
Template DNA | 0.1-1 μg | - |
RNase Free Water | up to 20 μL | - |
3、混匀、离心、37℃反应2-3 h。
4、（选做）向反应体系中加入Dnase I，37℃孵育15 min，消化DNA模板。
注意事项
1、模板DNA的纯度对体外转录过程影响很大。模板制备过程中的RNase残留会影响体外转录产生的RNA质量。模板DNA应为RNase-Free、高纯度，建议OD260/280为1.8~2.0。
2、添加体系时，模板最后加入。Transcription Buffer (10 ×)中含有亚精胺，亚精胺浓度过高会引起DNA模板沉淀。
3、反应体系中可添加RNase Inhibitor，防止RNase污染。建议20 μL体系中添加4 U RNase Inhibitor。
4、反应体系中可添加Pyrophosphatase, Inorganic，提高RNA产量。建议20 μL体系中添加0.02 U Pyrophosphatase, Inorganic。
仅供科研实验使用
鄂公网安备：
