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E.coli Poly(A) Polymerase 产品说明书
产品名称 | 产品货号 | 规格 |
E.coli Poly(A) Polymerase (5 U/μL) | Frd00026 | 100U/1000u |
产品概述
E.coli Poly(A) Polymerase，即E.coli Poly(A)聚合酶，能以不依赖于模板的方式催化ATP以AMP的形式依次掺入到RNA 3'末端。E.coli Poly(A)聚合酶能以各种RNA单链为底物，不能以DNA为底物，双链RNA以及过短的寡聚核苷酸不推荐作为加尾反应的底物。E.coli Poly(A)聚合酶具有很高的加尾效率，可以在RNA的3´末端加入20~200个A碱基。
保存及运输条件
-30~-15℃保存，干冰运输。
产品基本信息
产品名称 | E.coli Poly(A) Polymerase |
来源 | E.coli |
活性 | 5 U/μL |
储存缓冲液 | 20 mM Tris-HCl, 300 mM NaCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 50% Glycerol, 0.1% Triton X-100 (pH 7.5, 25°C) |
储存条件 | -20℃ |
加尾缓冲液（1X） | 50 mM Tris-HCl (25℃, pH 7.8), 250 mM NaCl, 10 mM MgCl2 |
酶活定义 | 37℃，pH 8.0条件下，10分钟内将1 nmol AMP掺入RNA所需要的酶量定义为1个活性单位 |
产品应用
1、为RNA添加Poly(A)尾，用于反转录后克隆或亲和纯化。
2、用于RNA 3´末端标记。
3、增加mRNA稳定性，提高mRNA在真核细胞中的翻译效率
使用方法
1、反应体系
组分 | 体积（μL） |
10 × Poly(A) Polymerase Buffer | 2 μL |
ATP (10 mM) | 1 μL |
RNase Inhibitor (40 U/μL) | 0.5 μL |
RNA | 10 μg |
PAP | 0.2-1 μL |
RNase Free Water | Up to 20 μL |
2、反应条件
37℃反应30 min-1 h。加入EDTA至终浓度10 mM或者65°C，20 min终止反应。
注意事项
1、Poly(A)加尾长度与E.coli Poly(A) Polymerase酶量、ATP量和反应时间有关。
2、E.coli Poly(A) Polymerase需要有Mg2+等二价离子才能发挥活性。
3、E.coli Poly(A) Polymerase将AMP添加到RNA的3´末端具有较高的选择性，并不会在所有RNA分子中添加相同长度的Poly(A)。
仅供科研实验使用
鄂公网安备：
