DH10BAC感受态细胞

保存条件：-80℃。

1.产品简介：

本产品是采用大肠杆DH10BAC菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，主要用于生产重组杆状病毒分子（Bac-to-Bac杆状病毒表达系统），可用于蓝白斑筛选。

基因型：F- mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC) 80lacZM15 lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆ (ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG /pMON14272 / pMON7124

特点：1. DH10BAC菌株中含有父本杆粒 bMON14272 、 辅助质粒 pMON7124 ： 父本杆粒 bMON14272包含 mini-F 复制子, 卡那抗性基因, attTn7 位点和 lacZα互补因子；辅助质粒 pMON7124 含有 tnsABCD 区，具有四环素抗性，在细胞扩增过程中丢失，但可提高供体质粒 pFastBac 转化后的基因转座效率。2. mcrA、mcrBC 及 mrr 突变使 DH10Bac 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA。3. recA1 和 endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。4.φ80dlacZ∆M15 的存在使 DH10BAC 可用于蓝白斑筛选。具卡那霉素和四环素抗性，pUC19质粒检测，转化效率可达10⁸ cfu/μg DNA。

2.使用说明：

1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2．待感受态细胞融化后，加入适量目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，冰浴30min。

3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。

4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。

5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12~16h。

3.注意事项：

1．感受态细胞最好在冰上融化。

2．混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3．转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

4．涂板时务必涂干，平板表面不留任何水渍。

*本试剂仅供实验室研究使用