1.包装清单：

2.产品简介：

革兰氏染色法是一种细菌学中广泛使用的鉴别染色法，在结晶紫初染和碘液媒染后于细胞壁内形成不溶于水的复合物，呈紫色可在显微镜下观察。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌由于细胞壁结构的不同，因此在染色后可以区分开来：革兰氏阳性菌细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，再加上它不含类脂能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差易被酒精脱色因此呈无色，再用一种红色染料碱性番红进行复染；阴性菌则被染上红色，阳性菌仍带紫色。

3.保存条件：2-8℃保存，1年有效。

4.使用说明：

A.标本处理：

1)    有菌部位的标本可直接涂片,如粪便、痰液、各种拭子、创面等。

2)    无菌部位的标本应取适量标本（最高可达5-7 ml）,经3000 rpm 离心10 min.，取沉渣涂片染色，如脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等。

B.涂片制作：

菌液涂片时，标本可直接在玻片上涂布，用接种环沾取菌液点在载玻片上;菌落涂片时，先取生理盐水一滴，置玻片上，用接种针挑取菌落在盐水中涂布。制作的涂片应自然干燥，涂面朝上通过火焰2-3次，进行固定，温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细菌形态改变。将固定后的涂片进行染色。

C.染色方法：

1)    染色：向固定的涂片上滴加结晶紫染液后，染色1 min，

2)    水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染液，吸干水分。

3)    媒染：滴加一滴碘液后染色1 min，水洗，吸干水分。

4)    脱色：滴加95%酒精,摇动玻片,根据涂片厚度,脱色约30-60 s，至无紫色液体流出即可立即水洗。

5)    复染：滴加番红复染3～5 min，水洗，吸去水分。

6)    观察：调整适当倍数油镜镜检。

革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色不够，阴性菌可能被误染为阳性菌；但若脱色过度，则阳性菌可能被误染为阴性菌。另外，菌龄对染色也会有一定的影响，若阳性菌培养时间过长，导致菌死亡或者部分菌自行溶解了，都可能会呈阴性反应。

D.结果观察：红色为革兰氏阴性，紫色为革兰氏阳性。

5.注意事项：

1)    标本涂片不宜太厚，严格按操作要求进行。

2)    固定时，玻片通过火焰温度不能太高。

3)    若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。

4)    若碘液变透明，则不能使用。

5)    水洗时动作要轻柔,沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗,不要把菌体冲掉。

其配制方法如下：

1)    结晶紫(crystal violet)液：100 ml

A.结晶紫乙醇饱和液20 ml ：2 g结晶紫溶于20 ml的95%乙醇中

B.1%草酸铵水溶液80 ml 

将A、B两液混匀静置24 h后过滤即可。

2)    卢戈(Lugol)氏碘液：0.66 g的碘化钾溶于少量蒸馏水中，再加入0.33 g的碘使之完全溶解，最后加蒸馏水定容至100 ml，→贮于棕色瓶内备用，变黄则不能使用。

3)    95%乙醇：用于脱色，脱色后用番红复染即可。

4)    番红溶液：2.5 g的番红O(safranine，又称沙黄O)加入100 ml的95%乙醇，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20 ml与80 ml蒸馏水混匀即可。 

*本试剂仅供实验室研究使用