教您使用超滤管

超滤管产品说明书

1.产品简介：

超滤离心管具有快速超滤功能，能够达到较高的浓缩倍数，轻松实现从稀释和复杂的混和样本中浓缩回收目的产物。垂直设计的超滤膜以及较大的有效滤膜表面积有助于快速的样本处理，获得较高样本回收率(通常> 90%) ,并达到30倍的浓缩。                  

根据标称分子量限值(NMWL)的不同,典型处理时间为10-30分钟。超滤膜的垂直设计也最大程度降低了溶质极化造成的滤膜结垢;死体积设计能有效防止过度离心使样本干掉而造成样本损失。收集滤出液后，浓缩样本(截留部分)可通过一个简便的倒置(上下反转)离心步骤而实现高效回收。超滤管未经消毒,仅供一次使用。.

产品系列包括5种不同的截留分子量(即标称分子量限值, NMWL)。这些超滤管仅供研究使用，不适用于诊断程序。

2.应用：

1）.浓缩含有抗原、抗体、酶、核酸（DNA/RNA样本，单链或双链）、噬菌体等微生物样本

2）.纯化组织培养提取液或细胞裂解液中的大分子成分，去除反应液中的引物、接头或分子标记，在HPLC前去除蛋白质。

3）.除盐，缓冲液更换，或渗滤。

3.超滤管示意图：

超滤管提供了两个微量离心管。在操作过程中，一个用于收集滤出液，而另一个用于回收浓缩后的样本。

4.储存：

（15-30℃）室温存放。

5.预清洗：

超滤管的超滤膜含有微量甘油。如果担心干扰后续分析,可用缓冲液或Milli-Q水进行预清洗。如果干扰仍然存在,可用0.1M NaOH清洗,再用缓冲液或Milli-Q8水清洗并甩干。

注意:超滤离心管中的滤膜一旦润湿 后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用，则让液体保留在滤膜上，直到使用。

6.使用方法：

1）.将超滤内管插入所提供的一个微量离心管中。

2）.向超滤管内管中加入不超过500 μL的样本,并盖上盖子。

3）.将盖好盖子的超滤管放入离心转子中，让盖子的连接带朝着转子的中央;用一个类似的超滤管平衡。

4）.以14,000 x g离心约10-30分钟,具体时间取决于所使用超滤管的NMWL。

5）.离心结束后将整个超滤管从离心机中取出,取出内管。

6）.为了回收浓缩后的溶质,将内管倒过来插在-个干净的微量离心管中。放在离心机中,让打开的盖子朝着转子的中央;用一个类似的超滤管进行平衡。以1 ,000 x g离心2分钟,使浓缩后的样本从超滤内管转移到收集管中。超滤液可以保存在收集管中。

注意：要达到理想的回收效果，请尽早进行倒置离心。

7.脱盐或渗滤

脱盐、更换缓冲液或渗滤是从含有生物分子的溶液中去除盐分或溶剂的重要方法。盐分去除或缓冲液更换可通过超滤管来完成，具体过程是浓缩样本，弃去滤出液,然后向浓缩液中加入任何所需的溶剂,恢复到样本原先的体积。"洗出"的过程可反复进行，直到杂质的浓度被充分降低。

请参看下面的例子。

关于超滤管的常见问题与解答

Q:超滤管的膜材质是什么?

A:超滤管的膜材质为默克密理博特有的Ultracel再生纤维素膜，生产工艺严格,截留分子量明确而准， 蛋白吸附损失小。

Q:如果要用超滤的方法分离两种蛋白，那么这两个蛋白的大小需要相差多少?

A:按照经验,建议两个蛋白的分子量要相差 一个数量级(10倍)。

Q:超滤管可以用酒精消毒灭菌么?

A: 超滤管与70%乙醇是兼容的，但是对灭菌处理的具体方法没有做相关的测试，所以无法提供更进一步的参考信息。

Q:超滤装置是否可以用于高压灭菌?

A: 超滤管都是采用热封设计,不可以用高压高温灭菌。

Q:蛋白在浓缩时出现了沉淀,如何改进?

A:蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。建议蛋白浓缩后的 浓度不超过20mg/ml.对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的蛋白，建议的改进方法是:

1)离心力降为推荐离心力的30%-50%

2)改用截留分子量大的超滤管(如原本选用10k,此时可以选择30k)

3)在浓缩过程中取出超滤管, 用吸头反复吹吸几次后再继续浓缩

Q:浓缩后发现浓缩液中没有目的蛋白,可能的原因有哪些?

A:首先,超滤管的蛋白起始浓度为25ug/ml.请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次,如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因:

1)如果目的样本在滤过液中，那么请排查: .

a)是否选择了合适截留分子量的超滤管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)?

b)使用的离心力是否是在限定范围内?如果使用的是rpm,请换算成相应的g离心力,具体换算方

法请垂询。

c) 离心机最近是否有校准过?

Q:有时候用超滤离心管连水都离不下来,可能是什么原因?

A:超滤膜中含有微量甘油。如果出现这种情况,请先用0.1 N NaOH清洗再离心。最后用缓冲液或Milli-Q@水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用,请保持润湿状态,避免重新干燥。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

*本试剂仅供实验室研究使用