抗原免疫注意事项

1. 纯度问题

作为抗原，其纯度越高抗体的下游制备工艺会越简单：对于多抗来说，高免血清中针对目抗原的抗体分子越多更容易得到效价高、背景更低的抗体；对于单抗制备来说，就更容易筛选到特异性高效价的抗体分泌细胞株。

2. 抗原毒性问题

作为抗原的物质，对动物机体毒性越小越好；毒性大，动物容易死亡或状态不好，很难产生出高品质抗体。科研人员为了制备蛇毒蛋白的单抗，采用体外细胞免疫法（也叫细胞刺激免疫法）：把脾脏B淋巴细胞取出体外培养，加入刀豆素刺激的同时加入抗原刺激B淋巴细胞致敏反应。

3. 抗原溶剂问题

抗原的溶剂一般选用PBS和生理盐水比较友好，但在抗原制备提纯的过程中不可避免的会引入一些去污剂[Triton，SDS或SKL（十二烷基肌氨酸钠）等]或其他有害化学试剂(如过量Tris等)。在免疫前这些物质不除去，动物免疫后会死亡，即使不死亡也会使动物机体受到剧烈刺激，免疫力严重下降。对于难溶蛋白（比如包涵体），可以溶解在低浓度尿素里面，因为动物可以耐受低浓度尿素。

4. 佐剂问题

佐剂的选择也是抗体制备方案中非常重要的环节，目前最主流的还是弗氏佐剂，由Freund最先研发出来，主要是用矿物油和糖类，弗氏佐剂又分不完全佐剂和完全佐剂：不完全佐剂里面加入卡介苗就是完全佐剂，用于初次调动机体免疫系统机能；弗氏佐剂主要是将水溶性的抗原物质包裹其中，形成一个抗原缓释仓库，源源不断刺激机体产生免疫反应。

福因德生物技术团队开发出的FrdbioR水溶性佐剂，改变传统佐剂的思维模式，通过佐剂内高分子组分物理性吸附抗原达到缓释目的，同时含有可快速刺激免疫细胞分裂成分，双重效果助力抗体效价快速提升。由于其水溶性，不需要乳化，只要混匀即可免疫，减少乳化过程中浪费，对于珍稀抗原特别适合，其抗原使用量只为弗氏佐剂的1/5；同时对抗原的结构更为友好，特别适合于制备针对抗原构象的抗体。

抗原设计是抗体制备方案设计的核心，目前用于蛋白抗体制备的最常用的手段和方法是重组蛋白和多肽，而重组蛋白中最常用的是原核重组表达蛋白，因为其简单易操作，产量高，抗原表位暴露充分，蛋白性质稳定而倍受青睐。本书将以原核重组蛋白和多肽抗原设计及抗体制备、纯化、标记等为具体实例，具体阐述抗体制备的全过程。