重组质粒的诱导表达——表达宿主菌及诱导表达
1.表达宿主菌的选择
大肠杆菌常用的表达宿主菌有E.ColiBL21(DE3),E.ColiRossatta(DE3),E.ColiBL21(DE3)Condon Plus。针对特殊的目标蛋白其所需要的宿主菌也不相同,每种宿主菌的基本特征可在本网站查询,福因德生物可提供表中所列菌种的感受态细胞,如需更多信息可联系福因德技术部门。
货号 | 产品名称 | 规格 | 产品特点与应用 |
MCC0010 | E.coli DH5α感受态细胞 | 100μl×10 | 实验室最常用的感受态细胞,转化效率高,可用于蓝白斑筛选。 |
MCC0010S | E.coli DH5α超级感受态细胞 | 100μl×10 | 主要用于文库的构建;超高的转化效率,可达107cfu/μg。 |
MCC0020 | E.coli BL21(DE3) 感受态细胞 | 100μl×10 | λDE3溶原菌,带有T7 RNA聚合酶,可用于表达T7启动子控制的目的基因,也可以表达大肠杆菌启动子lac、tac、trc及trp控制的基因。 |
MCC0030 | E.coli BL21(DE3)plysS感受态细胞 | 100μl×10 | 除了具有BL21(DE3)优势外,PlysS含有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达,所以适合表达毒性蛋白。 |
MCC0050 | E.coli Rosetta(DE3) 感受态细胞 | 100μl×10 | 补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA)对应的tRNA,提高外源基因,尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。 |
MCC0040 | E.coli BL21(DE3) Condon Plus感受态细胞 | 100μl×10 | 用于原核表达,缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶,补充大肠杆菌缺乏的4种稀有密码子(AGA,AUA,CCC,CUA);提高富含AT-或 GC-的真核基因在原核系统中的表达水平 |
2.优化表达条件
表达条件(包括IPTG浓度、诱导温度和和诱导时间等)的优化(可参照以下的正交图设计实验),主要是为了提高蛋白产量/提高可溶性蛋白表达比例;选用不同诱导时长主要是为了选择最佳收获时间(时间短了,蛋白产量不够;时间长了,大量蛋白降解);温度诱导主要是为了得到可溶性表达的蛋白,很多的蛋白即使低温诱导也不能实现可溶性表达,一定要实现可溶性表达尽可能选择促溶标签/调整IPTG浓度,使翻译速度放缓有充分时间折叠。福因德生物技术团队研发的自诱导培养基(Frdbio T7表达自诱导培养基即用型,PER0011)就是充分利用此原理,对表达在包涵体状态的蛋白优化为上清可溶表达状态的成功率高达60%。可溶性表达的策略在“蛋白可溶性表达的解决方案”中有详细的阐述。
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